Epo Saposhnikovia divaricata mimọ fun abẹla ati ọṣẹ ti n ṣe itọpa osunwon epo pataki epo tuntun fun awọn olutapa igbona igbona

kukuru apejuwe:

 

2.1. Igbaradi ti SDE

Awọn rhizomes ti SD ni a ra bi ewebe ti o gbẹ lati Hanherb Co. (Guri, Korea). Awọn ohun elo ọgbin ni a ti fi idi mulẹ taxonomically nipasẹ Dokita Go-Ya Choi ti Koria Institute of Oriental Medicine (KIOM). Ayẹwo iwe-ẹri (nọmba 2014 SDE-6) ti wa ni ifipamọ sinu Herbarium Korean ti Awọn orisun Egboigi Standard. Awọn rhizomes ti o gbẹ ti SD (320 g) ni a fa jade lẹẹmeji pẹlu 70% ethanol (pẹlu 2 h reflux) ati pe jade lẹhinna ni idojukọ labẹ titẹ dinku. Decoction ti wa ni filtered, lyophilized, ati ti o ti fipamọ ni 4°C. Awọn ikore ti gbigbẹ jade lati awọn ohun elo ibẹrẹ robi jẹ 48.13% (w / w).

 

2.2. Pipo Kiromatografi Liquid Giga-Iṣẹ (HPLC) Onínọmbà

A ṣe itupalẹ Chromatographic pẹlu eto HPLC kan (Waters Co., Milford, MA, USA) ati aṣawari array photodiode kan. Fun itupalẹ HPLC ti SDE, prim-OIdiwọn -glucosylcimifugin ni a ra lati Ile-iṣẹ Igbega Koria fun Ile-iṣẹ Oogun Ibile (Gyeongsan, Koria), atiiseju-OGlucosylhamaudol ati 4'-O-βD-glucosyl-5-O-methylvisamminol ti ya sọtọ laarin ile-iyẹwu wa ati idanimọ nipasẹ awọn itupalẹ iwoye, nipataki nipasẹ NMR ati MS.

Awọn ayẹwo SDE (0.1 miligiramu) ni tituka ni 70% ethanol (10 milimita). Iyapa Chromatographic ni a ṣe pẹlu ọwọn XSelect HSS T3 C18 (4.6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). Ipele alagbeka jẹ acetonitrile (A) ati 0.1% acetic acid ninu omi (B) ni iwọn sisan ti 1.0 mL/min. A lo eto gradient multistep kan bi atẹle: 5% A (iṣẹju 0), 5–20% A (0–10 min), 20% A (iṣẹju 10–23), ati 20–65% A (iṣẹju 23–40) ). Ipari igbi wiwa ti ṣayẹwo ni 210-400 nm ati gba silẹ ni 254 nm. Iwọn abẹrẹ jẹ 10.0μL. Awọn ojutu boṣewa fun ipinnu awọn chromones mẹta ni a pese sile ni ifọkansi ikẹhin ti 7.781 mg/mL (prim-O-glucosylcimifugin), 31.125 mg/mL (4′-O-βD-glucosyl-5-O-methylvisamminol), ati 31.125 mg/mL (iseju-O-glucosylhamaudol) ni methanol ati ki o tọju ni 4°C.

2.3. Igbelewọn ti Anti-iredodo aṣayan iṣẹ-ṣiṣeNinu Vitro

2.3.1. Aṣa sẹẹli ati Itọju Ayẹwo

Awọn sẹẹli RAW 264.7 ni a gba lati Akojọpọ Aṣa Iru Amẹrika (ATCC, Manassas, VA, USA) ati dagba ni alabọde DMEM ti o ni awọn oogun aporo 1% ati 5.5% FBS. Awọn sẹẹli ti wa ni idawọle ni oju-aye ọriniinitutu ti 5% CO2 ni 37°C. Lati mu awọn sẹẹli naa pọ, alabọde ti rọpo pẹlu alabọde DMEM tuntun, ati lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) ni 1μg/mL ni a ṣafikun ni wiwa tabi isansa ti SDE (200 tabi 400μg/ml) fun afikun wakati 24.

2.3.2. Ipinnu ti Nitric Oxide (NO), Prostaglandin E2 (PGE2), Tumor Necrosis Factor-α(TNF-α), ati Interleukin-6 (IL-6) iṣelọpọ

A ṣe itọju awọn sẹẹli pẹlu SDE ati jijẹ pẹlu LPS fun awọn wakati 24. KO si iṣelọpọ ti a ṣe itupalẹ nipasẹ wiwọn nitrite nipa lilo reagent Griess ni ibamu si iwadi iṣaaju [12]. Isọjade ti awọn cytokines iredodo PGE2, TNF-α, ati IL-6 ti pinnu nipa lilo ohun elo ELISA kan (awọn eto R&D) ni ibamu si awọn ilana olupese. Awọn ipa ti SDE lori NO ati iṣelọpọ cytokine ti pinnu ni 540 nm tabi 450 nm nipa lilo EnVision Wallac™oluka microplate (PerkinElmer).

2.4. Igbelewọn ti Antiosteoarthritis IṣẹNinu Vivo

2.4.1. Awọn ẹranko

Awọn eku Sprague-Dawley ọkunrin (ọsẹ 7) ni a ra lati ọdọ Samtako Inc. (Osan, Korea) ati gbe labẹ awọn ipo iṣakoso pẹlu ina 12-h / iyipo dudu ni°C ati% ọriniinitutu. A pese awọn eku pẹlu ounjẹ yàrá ati omiipolowo libitum. Gbogbo awọn ilana idanwo ni a ṣe ni ibamu pẹlu awọn ilana Awọn ile-iṣẹ Ilera ti Orilẹ-ede (NIH) ati ti a fọwọsi nipasẹ Igbimọ Itọju Ẹran ati Lilo ti ile-ẹkọ giga Daejeon (Daejeon, olominira ti Korea).

2.4.2. Induction ti OA pẹlu MIA ni Eku

Awọn ẹranko ni a sọtọ ati sọtọ si awọn ẹgbẹ itọju ṣaaju ibẹrẹ ti iwadii naa (fun ẹgbẹ kan). Ojutu MIA (3 mg/50μL ti 0.9% saline) ni itasi taara sinu aaye intra-articular ti orokun ọtun labẹ akuniloorun ti a fa pẹlu adalu ketamine ati xylazine. A pin awọn eku laileto si awọn ẹgbẹ mẹrin: (1) ẹgbẹ iyọ ti ko ni abẹrẹ MIA, (2) ẹgbẹ MIA pẹlu abẹrẹ MIA, (3) ẹgbẹ ti a ṣe itọju SDE (200 mg / kg) pẹlu abẹrẹ MIA, ati (4) ) indomethacin- (IM-) ẹgbẹ ti a tọju (2 mg/kg) pẹlu abẹrẹ MIA. Awọn eku ni a nṣakoso ni ẹnu pẹlu SDE ati IM 1 ọsẹ ṣaaju abẹrẹ MIA fun ọsẹ mẹrin. Iwọn ti SDE ati IM ti a lo ninu iwadi yii da lori awọn ti o gbaṣẹ ni awọn ẹkọ iṣaaju [10,13,14].

2.4.3. Awọn wiwọn ti Pipin Ti nso iwuwo Hindpaw

Lẹhin ifilọlẹ OA, iwọntunwọnsi atilẹba ni agbara gbigbe iwuwo ti hindpaws jẹ idalọwọduro. Ayẹwo ailagbara kan (ohun elo Lindon, Norfolk, UK) ni a lo lati ṣe iṣiro awọn ayipada ninu ifarada ti o ni iwuwo. Wọ́n fara balẹ̀ gbé eku sínú yàrá ìdiwọ̀n. Agbara gbigbe iwuwo ti o ṣiṣẹ nipasẹ ẹsẹ ẹhin jẹ aropin lori akoko 3 s. Iwọn pinpin iwuwo jẹ iṣiro nipasẹ idogba atẹle yii: [iwuwo lori ẹsẹ ọtún ẹsẹ ọtún/(iwuwo lori ẹsẹ apa ọtun + iwuwo lori ẹsẹ ẹhin osi)] × 100 [15].

2.4.4. Awọn wiwọn ti Serum Cytokine Awọn ipele

Awọn ayẹwo ẹjẹ ti wa ni centrifuged ni 1,500 g fun 10 min ni 4 ° C; lẹhinna a ti gba omi ara ati ti a fipamọ si -70 ° C titi lilo. Awọn ipele IL-1β, IL-6, TNF-α, ati PGE2 ninu omi ara ni a ṣe iwọn lilo awọn ohun elo ELISA lati R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) ni ibamu si awọn ilana olupese.

2.4.5. Real-Time Quantitative RT-PCR Analysis

Lapapọ RNA ti yọ jade lati inu iṣan isẹpo orokun nipa lilo TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), yiyipada-ti o kọ sinu cDNA ati PCR-ti o pọ si nipa lilo ohun elo TM Ọkan Igbesẹ RT PCR pẹlu alawọ ewe SYBR (Awọn ohun elo Biosystems ti a lo. , Grand Island, NY, USA). PCR pipo gidi-akoko ni a ṣe ni lilo Eto Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Awọn ilana alakoko ati ilana-iwadii ti han ni Tabili1. Aliquots ti awọn cDNA ayẹwo ati iye dọgba ti GAPDH cDNA ni a pọ si pẹlu TaqMan® gbogbo PCR adapo titunto si ti o ni DNA polymerase ni ibamu si awọn ilana olupese (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). Awọn ipo PCR jẹ iṣẹju 2 ni 50°C, iṣẹju 10 ni 94°C, 15 s ni 95°C, ati iṣẹju 1 ni 60°C fun awọn iyipo 40. Idojukọ ti jiini ibi-afẹde ni a pinnu nipa lilo Ct afiwera (nọmba iwọn ala-ilẹ ni aaye-agbelebu laarin idite imudara ati iloro) ọna, ni ibamu si awọn itọnisọna olupese.

Iye owo FOB:US $ 0.5 - 9,999 / nkan

Min.Oye Ibere:100 nkan / nkan

Agbara Ipese:10000 Nkan / Awọn nkan fun oṣu kan